步驟：

　　1. 前一天下午做好所需數(shù)量的Feeder細胞板;

　　2. 提前半小時左右將培養(yǎng)基從4℃冰箱取出，放于室溫(或者放于37℃溫箱內(nèi));

　　3. 將ES細胞培養(yǎng)皿、Feeder細胞培養(yǎng)皿從培養(yǎng)箱內(nèi)取出(相差顯微鏡下作常規(guī)觀察，F(xiàn)eeder細胞應生長良好，細胞覆蓋95%左右，至少90%以上的培養(yǎng)皿面積);ES細胞應生長良好，接近長滿培養(yǎng)皿，細胞集落大小一致、疏密均勻，集落形狀規(guī)則、呈橢圓形、邊緣光滑、表面光滑，細胞生長致密、核大、胞質(zhì)少;上海創(chuàng)賽科技提供6.0CM一次性細胞培養(yǎng)皿，平底滅菌，適合細胞貼壁生長 ,商品編號：C81-TCD010060-600個/箱，價格652.5元。

　　4. 將ES細胞培養(yǎng)皿內(nèi)的液體吸出、棄去，用PBS 1 mL左右洗一遍，加入胰蛋白酶溶液，作用約30秒，小心吸出胰蛋白酶溶液，棄去;再作用1—5分鐘，不時觀察，待細胞層(皿底一層白色臟東西樣膜)出現(xiàn)裂縫并明顯開始下滑時，補加培養(yǎng)基，適度吹打(視消化程度及管口粗細而定，至看不到明顯的大的細胞團塊為止);平均分到Feeder培養(yǎng)皿中(滴加，以免將Feeder細胞吹脫落下來)，滴加補加培養(yǎng)基至5 ml左右(滴加，以免將Feeder細胞吹脫落下來;若為3.5cm培養(yǎng)皿，則補加至3ml左右)，作好標簽;上海創(chuàng)賽科技提供E30-LW300LT生物顯微鏡 ,商品編號：E30-LW300LT生物顯微鏡，詢價。

　　5. 前后左右水平晃動培養(yǎng)皿，使ES細胞均勻分布于培養(yǎng)皿中，放入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

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